細胞名稱：NCI-H1651人非小細胞肺癌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

YS3463CL5178YTK+/-clone3.7.2C小鼠淋巴瘤細胞

YS3464CU14-GFPGFP標記的小鼠子宮頸癌細胞

YS3465CWI38/VA13SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞

YS3466CPtK1[NBL-3]袋鼠腎細胞

YS3467CAE-1小鼠雜交瘤細胞抗AChE

YS3468CAE-2小鼠雜交瘤細胞抗AChE

YS3469CA-204[A204]人橫紋肌肉瘤細胞

YS3470CMA-104[MA104;MA104]羅猴胎腎細胞

YS3471CPC-12低分化大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞低分化

YS3472CPC-12高分化大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞高分化

YS3473CRamos[RA1]人B淋巴細胞瘤細胞

YS3474CTE671sublineNo.2人橫紋肌肉瘤細胞

YS3475CP69人前列腺上皮細胞

YS3476CCHO/dhFr-[CHO-DXB11]倉鼠卵巢細胞二氫還原酶缺陷

YS3477CMv.1.Lu[NBL-7;Mv1Lu]貂肺上皮細胞

YS3478CVEROC1008[VeroE6]非洲綠猴腎細胞

YS3479CMHCC97-L人低轉(zhuǎn)移肝癌細胞

YS3480CBewo人絨毛膜腫瘤細胞

YS3481CRK-13兔腎細胞系

YS3482C104C1轉(zhuǎn)化的豚鼠胎體細胞

YS3483CW6/32小鼠B細胞雜交瘤細胞

YS3484CC6/36[CloneC6/36]蚊子細胞

YS3485CC8-D1A鼠小腦細胞

YS3486CPT67逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細胞

YS3487CU266人多發(fā)性骨髓瘤細胞

YS3488CA549/DDP人肺腺癌耐株

YS3489CMCF-7/DDP人乳腺癌耐藥性細胞

YS3490CMCF-7/ADM人乳腺癌耐藥性細胞

YS3491CMCF-7/Taxol人乳腺癌耐藥性細胞

YS3492CSK-OV-3/DDP人卵巢腺癌耐藥性細胞

YS3493CSGC-7901-GFP人胃腺癌細胞綠色熒光

YS3494C4179長尾綠猴胚胎細胞

YS3495CSRSV/3T3小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞

YS3496COKT3小鼠雜交瘤細胞抗CD3

YS3497CM-7人胚胎成纖維細胞

YS3498CM-22人胚胎成纖維細胞

YS3499C4647長尾綠猴腎細胞

YS3500C293H人胚腎細胞

YS3501CHSPC-1人造血干細胞

YS3502CPC-61小鼠雜交瘤細胞CD25

YS3503CLM9小鼠HGPRT基因缺陷型骨肉瘤細胞

YS3504CKasumi-1人急性原粒細胞白血病細胞

YS3505CWEHI164鼠纖維肉瘤細胞

YS3506CDMS153人小細胞肺癌

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