Bst 4.0 LowSalt Red Bead試劑為全體系凍干微球制品，內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用

的低緩沖鹽（Low Salt）、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA

聚合酶、紅黃 pH 變色染料。由于 LAMP 在反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生

大量的 H+，導(dǎo)致反應(yīng)體系 pH 下降，因此，低緩沖鹽體

系條件下，可搭配 pH 敏感染料實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè) LAMP 檢

測(cè)。該制品中包含低濃度的 Tris（pH8.8）緩沖鹽。

貨 號(hào) 名 稱 規(guī)格

A3828-01R Bst 4.0 LS Red Bead 100 個(gè)

儲(chǔ)存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個(gè)月。

使用實(shí)例：

1. 配制反應(yīng)體系

Bst 4.0 LS Red Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到液體總量 25 μl

2. 蓋上管蓋，置于 65°C 進(jìn)行反應(yīng) 20~30min。 肉眼觀

察結(jié)果，黃色為陽性，紅色為陰性。

3. 10xLAMP Primer Mix 的配制，F(xiàn)IP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。引物的稀

釋液均使用 ddH2O（pH8.0-9.0），不能使用含有 Tris 緩

沖鹽系統(tǒng)。由于該變色方法對(duì) pH 敏感，多數(shù)情況下引物

溶解后成酸性，因此在 10x 引物中加入終濃度 1 mM

NaOH 使引物恢復(fù)到中性 pH（~8.5），注意 NaOH 需新

鮮配制，可配制成 50-100 mM 濃度使用。

注意事項(xiàng)：

（1）紅黃變色反應(yīng)依賴于反應(yīng)體系中 pH 的變化來實(shí)現(xiàn)，

因此模板中 Tris 鹽、NaOH 等成分對(duì)反應(yīng)有至關(guān)重要的

影響。在采用核酸純化的樣本檢測(cè)時(shí)，推薦使用 ddH2O

進(jìn)行洗脫。

（2）關(guān)于 DEPC 水使用的特殊說明：由于 DEPC 處理過

的 ddH2O 顯示很強(qiáng)的酸性，會(huì)直接導(dǎo)致溶解后的凍干球

成黃色。所以 DEPC 處理過的 H2O 必須經(jīng) NaOH 溶液調(diào)

整 pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我們推薦直接使用，水機(jī)

制備的 18.2Ω H2O，不影響 RNA 樣本的擴(kuò)增。

（3）在對(duì)粗制樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，最佳的粗制樣本為拭孖

樣本，拭孖樣本經(jīng) ddH2O 浸泡后，可以直接使用浸泡液

作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，無需核酸純化步驟。

（4）關(guān)于 LAMP 成品試劑的建議， Bst 4.0 LS 凍干球

為室溫穩(wěn)定狀態(tài)，可長期保存。將擴(kuò)增引物于 70°C 烘干，

再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測(cè)試劑。

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