5?-核苷酸酶(5?-NT或NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中，該酶活性變化常與ALP活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病

中，如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂病等，ALP活力增高，但是5?-NT活力正常，所以對(duì)于ALP活力提高的情況，

測(cè)定5?-NT活力有助于判斷ALP活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。

5′-核苷酸酶(5′-NT)檢測(cè)試劑盒(鉬藍(lán)比色法)的檢測(cè)原理為5?-核苷酸酶能催化5?-磷酸腺苷(AMP)水解，生成腺苷和

磷酸，后者與鉬酸銨反應(yīng)生成鉬藍(lán)，可用比色法測(cè)定無(wú)機(jī)磷的含量，計(jì)算5?-NT活性，利用鎳離子能選擇性的抑制5?-NT的特性

，在測(cè)定管不加人抑制劑鎳離子，測(cè)出的活性為ALP和5?-NT總活性，在對(duì)照管加入鎳離子，可以測(cè)出ALP的活性，

測(cè)定管的酶活性減去對(duì)照管的酶活性即獲得5?-NT活性，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)680nm處吸光度。5?-核苷酸酶的檢測(cè)對(duì)于研究自由基

代謝平衡，抗衰老和腫瘤發(fā)病機(jī)制具有一定的價(jià)值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測(cè)，亦可-20°℃保存。

3、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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